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简述单层贴壁细胞的冻存流程
日期:2024-11-01 07:46
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摘要:
简述单层贴壁细胞的冻存流程:
1、确保细胞符合冻存标准——a) 外观健康,形态学特征良好;b) 处于生长对数期;c) 无污染。
2、准备冻存管,每瓶细胞准备一支冻存管(冻存液配比=600μl培养基:300μl血清:100μl DMSO)。
3、胰酶消化,转移至离心管,准备离心
4、离心时,可加适量血清(5~10%);
5、离心完成后,去除上清液,使用1200ul培养基吹匀离心管内细胞;
6、离心管内加入600μl血清,小心吹匀,减少气泡产生;
7、逐滴加入...
简述单层贴壁细胞的冻存流程:
1、确保细胞符合冻存标准——a) 外观健康,形态学特征良好;b) 处于生长对数期;c) 无污染。
2、准备冻存管,每瓶细胞准备一支冻存管(冻存液配比=600μl培养基:300μl血清:100μl DMSO)。
3、胰酶消化,转移至离心管,准备离心
4、离心时,可加适量血清(5~10%);
5、离心完成后,去除上清液,使用1200ul培养基吹匀离心管内细胞;
6、离心管内加入600μl血清,小心吹匀,减少气泡产生;
7、逐滴加入DMSO共200μl(DMSO溶于水时大量放热,避免局部过热导致细胞热损伤),小心吹若干下,混匀液体;
8、转移细胞悬液进入冻存管,1ml/管,共2管;
9、冻存管梯度冷冻——4℃ 0.5h;-20℃ 2h冻存至固态;-80℃冰箱或液氮罐口(亦为-80℃)过夜,第2日再将冻存管没入液氮。或使用梯度冻存盒,常温下放入盒中,移入-80冰箱过夜,次日没入液氮