注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研
参数规格:
产品名称 |
猪流行性腹泻病毒定量RT-荧光PCR检测试剂盒 |
英文名称 |
详见说明 |
货号 |
BJ-R015277 |
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B磺胺嘧啶(标准品)质量规格:含量测定Sulfadiazine
ERBB3 Others Human 人 ErbB3 / HER3 人细胞裂解液 (阳性对照) 磺胺嘧啶质量规格:>99%,BRSulfadiazine
小鼠胚胎成纤维细胞;MEF炔诺孕酮(标准品)质量规格:含量测定Norgestrel
MSLN Others Human 人 MSLN / Mesothelin (aa 296-580) 人细胞裂解液 (阳性对照) BML-275 HCl,物质C盐酸盐质量规格:>98%,AMPK选择性抑制剂Dorsomorphin 2HCl;BML275.HCL;Compound C
人小肠平滑肌细胞完全培养基 100mL黄杨碱/环维黄杨星D(标准品)质量规格:滴定法≥99%,标准品Cyclovirobuxine
人非小细胞肺腺癌细胞;NCI-H157L-α-N-乙酰基-β-吲哚,英文名或英文缩写:N-Acetyl-L-tryptophan,级别:BR,98%,规格:10克
IL18RAP Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18RAP 人细胞裂解液 (阳性对照) 录加醋苄酯 Bqnzyl xlonofonmctq 201-23-1
人肝星形细胞完全培养基 100mL葡聚糖凝胶 Sephade... Sephadex G-15 11081-40-6 25G 分离试剂
Lewis细胞,小鼠肺癌细胞 CHL/IU [ CHL-11 ](中国仓鼠肺细胞) 非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A溴代十二烷基,英文名或英文缩写:DTAB,级别:IND,规格:100克
XCL1
Protein Human 重组人 XCL1 蛋白 (His 标签)Maleicacid 100g/250g/500g/1kg Sigma
M0375
猪流行性腹泻病毒定量RT-荧光PCR检测试剂盒PC-12(高分化) 大鼠肾上腺嗜鉻细胞瘤细胞(高分化)1-Chlorodecane1-录癸烷25克AR,98%
CA4 Others Human 人 CA4 / Car4 / CAIV 人细胞裂解液 (阳性对照) 轻氧化钴 Cobclt xy7noxidq 167-21-4
大额牛肺细胞;BFR-L1Piper100毫克GR,99%
LAIR2 Others Human 人 LAIR2 / CD306 人细胞裂解液 (阳性对照) RAPIDWESTERNBLOTTINGKIT-RABBIT-WT快速Western Blotting试剂盒-兔(湿转)01 KitRT/Secondary antibodies stored FROZEN
HSC 人胃癌细胞AmphotericinB 100mg原装/500mg/1g原装 INALCO1758-9313