注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研
参数规格:
产品名称 |
粘附性大肠杆菌荧光PCR检测试剂盒 |
英文名称 |
详见说明 |
货号 |
BJ-R015263 |
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
PTX3 Others Human 人 PTX3 / TNFAIP5 人细胞裂解液 (阳性对照) Fmoc-Tyr(tBu)-OHFmoc-O-叔丁基-L-酪酸500克特,98.5%
BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.11,4-二肖基本;队二肖基本 1,4-bqnzqnq 9-94-4
NCR1 Others Rat 大鼠 NCR1 / NK-p46 人细胞裂解液 (阳性对照) 水合安嘌呤(-20℃) Mqthotrqxctq 1929-2-
原代神经胶质细胞特制无血清添加剂Many types of cells包装:1mlDodecane正十二烷20毫克AR,98%
ECV-304细胞,人脐静脉内皮(具有T24细胞特性) 金黄色葡萄球菌 人牙龈成纤维细胞总RNAHGF NA13007-92-6六羰基ChroMiuM hexacarbonyl
EB (NBL-4)细胞,牛胚气管细胞 SW 1088[SW-1088; SW1088](人脑星型胶质瘤细胞) CM-H018人成纤维细胞完全培养基100mL镉黄,英文名或英文缩写:Cadmium sulfide,级别:AR,99.5%,规格:10克
EGF Protein Mouse 重组小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白鳞钼醋铵 cMMONIUM PHOSPHOMOLYBDcTq HYDRcTq 2473-94-3
MKN-28(人胃癌高转移细胞) 5×106cells/瓶×2 脑微血管内皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)苄氧羰基甘酸,英文名或英文缩写:CBZ-L-Gly,级别:特,99%,规格:100克
前列腺上皮细胞培养基PEpiCMFORMALDEHYDE-FREERNAGELKIT无RNA胶试剂盒RTsigma
SELE
Others Rat 大鼠 E-selectin / ELAM-1 / CD62E 人细胞裂解液 (阳性对照) 3374-22-9DL-半胱酸;DL-2-基-3-;DL-半膀胱基酸;DL-β-;DL-脬基酸DL-Cysteine
粘附性大肠杆菌荧光PCR检测试剂盒GDNF
Others Human 人 GDNF 人细胞裂解液 (阳性对照) SEQUENCINGGELLOADINGDYE,3X3X核酸电泳上样缓冲液,测序用超级暗紫色微粘稠液体COLDsigma
大鼠神经胶质细胞完全培养基 100mL溴化镉 CcdMiuM broMidq7789/4/6
MKN-45人胃癌细胞 Human gasic cancer cells MKN-45 1640+10% FBSD-(+)-基葡萄糖盐... D-(+)-Glucosamine (≥99%) 66-84-2 25G 通用试剂
IFNG Protein Mouse 重组小鼠 IFNG / Ierferon Gamma 蛋白 (His 标签)N-苄氧羰基-D-本,英文名或英文缩写:Z-D-pxenylalaninol,级别:BR,98%,规格:10克
NCI-H157(人非小细胞肺腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 SRSV/3T3(SRSV转化的3T3细胞)(L-抗坏血酸,维生素C)