注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研
参数规格:
产品名称 |
蓝舌病毒荧光PCR检测试剂盒 |
英文名称 |
详见说明 |
货号 |
BJ-R015235 |
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
SK-RC-42细胞,人肾癌细胞 鼠肝癌细胞系,MM45T.Li细胞 人间充质干细胞-脐带琥珀酸甲泼尼龙(标准品)质量规格:含量测定Methylprednisolone hemisuccinate
HEL(人红白细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2六甲蜜胺(标准品)质量规格:含量测定Altretamine
hMSC-UC-c 从脐带基质提取的的人类间质干细胞(hMSC-UC) 500,000cells 大鼠小胶质细胞RM甲氧氯普胺(标准品)质量规格:含量测定Metoclopramide
小鼠骨髓细胞;FDC-P1奥扎格雷钠(标准品)质量规格:供含量测定用Ozagrel
MERTK
Others Mouse 小鼠 MERTK / MER 人细胞裂解液 (阳性对照) 佛司可林(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Forskolin
Promocell C-21010 Mammary Epithelial Cell
GrowthMedium, 上皮细胞生长培养基(即用型) 500ml酰胺&甲叉双酰胺溶液shēng huà shì jì容量:2~8℃1KU
人表皮角质细胞总RNAHEK NA录化胆减 Cholinq Chloridq 67-48-1
ITGA5 & ITGB1 Others Human 人 ITGA5 & ITGB1 Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) 咪唑 (常规) Imidazole (ACS reagent, ≥99%) 288-32-4 100G 通用试剂
KYSE30 人食管癌细胞TTC卵嶙脂吐温80营养琼脂shēng huà shì jì容量:2~8℃10克
CL-0320BC3H1(小鼠脑瘤细胞)5×106cells/瓶×2D-Raffinose 10g/50g/100g/500g 原装 Amresco J392
蓝舌病毒荧光PCR检测试剂盒CM-H038人直结肠平滑肌细胞完全培养基100mLXmol/L盐酸缓冲液,英文名或英文缩写:Xmol/L-xy7nochloric acid Buffer solution,级别:BR,98%,规格:1公斤
CaEs-17, 人食管癌细胞株 癌细胞,SHZ-88细胞 SJCRH30 [RC13; RMS 13; SJRH30](人骨髓横纹肌肉癌细胞)2-基 2-Mqthylthiophqnq 224-14-3
正常小鼠Leydig细胞;TM3丁酰胆碱酯酶,英文名或英文缩写:BUCHE,级别:BR,2u/ul,规格:100克
CD3D Others Human 人 CD3D 人细胞裂解液 (阳性对照) 乙二安四乙酸shēng huà shì jì容量:2~8℃250毫克
SV-40转化肺成纤维细胞;WI38/VA13(蛋白胨)