注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研
参数规格:
产品名称 |
副鸡嗜血杆菌荧光PCR检测试剂盒 |
英文名称 |
详见说明 |
货号 |
BJ-R015219 |
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
SELPLG Others Human 人 RPSGL-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸异丙嗪质量规格:>98%,进分Promethazine
CM-M094小鼠胎儿表皮角质形成层细胞完全培养基100mL阿戈美拉汀(II型)质量规格:>99%,II晶型Agomelatine
MFI2 Others Mouse 小鼠 MFI2 / CD228 / melanoansferrin 人细胞裂解液 (阳性对照) 派洛宁Y(Ind Grade)质量规格:Ind GradePyronin Y
小鼠膀胱上皮细胞完全培养基 100mL鱼精蛋白硫酸盐来源于鲑鱼 质量规格:Grade II,sigma分装Protamine sulfate from Salmom
4T1小鼠癌细胞 Mouse breast cancer cell 4T1 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS5-溴-4-氯-3-吲哚基1酸盐钠盐(分子生物学级)质量规格:分子生物学级BCIP, di salt
双位点HC-kit受体细胞株;DMF7盐酸地匹福林(标准品)质量规格:含量测定Dipivefrin
PTH1R Others Human 人 PTH1R / PTHR1 / PTH1 Receptor 人细胞裂解液 (阳性对照) 甲基麦冬黄酮A(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Methylophiopogonone A
NCI-H1650 人非小细胞肺癌细胞喷昔洛韦(标准品)质量规格:含量测定Penciclovir
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌细胞贝那普利拉/苯那普利拉(标准品)质量规格:供HPLC法系统适用性试验用Benazeprilat
THPO
Protein Human 重组人 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 标签)奥美拉唑硫化物质量规格:美国进口Omeprazole Sulfide
副鸡嗜血杆菌荧光PCR检测试剂盒3T3-L1(小鼠胚胎成纤维细胞) 5×106cells/瓶×2L(-)Fucose6-脱氧-L-半乳糖5克高,99%
MME Others Human 人 CD10 / MME / Neprilysin 人细胞裂解液 (阳性对照) 3,5-二录本安 3,5-Dichlorocnilinq 66-43-7
SK-MEL-1, 人皮肤色素瘤细胞H-Pro-OMeoHClL-卟啉盐酸盐5克特,98.5%
SIGLEC5 Others Human 人 SIGLEC5 人细胞裂解液 (阳性对照) CoenzymeQ10癸1醌1克BR,1000u/ul
人胚肺二倍体细胞;HEL-1(L-本酸)