细胞复苏步骤

       细胞复苏是指将冻存在液氮里边或者-80℃冰箱中的细胞解冻，再培养传代。细胞复苏应采用快速融化的方法，这样的目的是为了让细胞外结晶在很短的时间内融化，从而避免慢悠悠的融化，使得水分渗入细胞内再结晶，从而对细胞再次造成伤害，从而影响细胞的存活率。

细胞复苏步骤：

1：细胞是冻在-80℃的环境里面的，所以拿出来后，应该尽快去37℃水浴锅里解冻（我一般是放在PE手套里面，然后在37摄氏度的水域上快速融化。）这一步的操作不要超过一分钟！

2：用预热的培养基稀释冻存的细胞（这步我会把融化的冻存液加入到15ml的管子里，加入3ml的预热的培养液，在超净台里完成）

3：离心200g 5-10min，具体的离心的时间不同的细胞略有不同得具体得看培养的protocol

4：在离心以后，倒掉上清（因为冻存液里用DMSO, 它的作用是在冻存细胞时加入，加入的量大概是总体积的10%，起到防冻剂的作用，防止冷冻过程中细胞内形成冰晶。）

5：用预热的培养液重悬细胞（根据培养的细胞皿的体积调整，我参照了GM12878,K562的培养protocol，刚开始的细胞密度不要超过10^6 /ML，但是细胞的密度也别太稀了，要不然长的会不好)

6：放到37℃，5%的二氧化碳培养箱中培养细胞。

PS：在看细胞冻存和复苏的时候，有一个词叫做“慢冻快融”，所以在解冻细胞的时候，在加入预热的培养基洗细胞之前，操作尽量的快，减少DMSO对细胞的伤害。我的冻存液的配方是：90%的FBS+10%的DMSO，冻存效果没问题！