注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。产品仅用于科研
参数规格:
产品名称 |
植物源性成分荧光PCR检测试剂盒 |
英文名称 |
详见说明 |
货号 |
BJ-R015266 |
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
1. 样本处理(样本处理区)
待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
组分每头份用量FMD RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
2.加样(样本处理区)
3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
MCF7细胞,癌细胞 人肝癌细胞,QGY-7701细胞 T-108B胶原酶(含100mL酶解缓冲液)10mL4-羟苯基马拉维若质量规格:美国进口4-Hydroxyphenyl Maraviroc
化大家鼠肺成纤维细胞;NRm依泽替米贝酮质量规格:美国进口Ezetimibe Ketone
EFNA1 Others Human 人 EFNA1 / Ephrin-A1 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-O-乙酰依泽替米贝质量规格:美国进口3-O-Acetyl Ezetimibe
胰腺星状细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)依泽替米贝羟基β-D-葡萄糖苷酸 质量规格:美国进口Ezetimibe Hydroxy β-D-Glucuronide
APOA1
Others Mouse 小鼠 ApoA1 人细胞裂解液 (阳性对照) 木栓酮(标准品)质量规格:鉴别FRIEDELIN
人脂肪细胞-内脏(HPA-v)(1×106 ) MDA-MB-231(ATCC来源), 人癌细胞 HumanPUC19质粒1克RT
人急性母细胞性白血病细胞;MOLT-41-炔基环己1 99% 1-qTHYNYLCYCLOHqXqNq 931-49-7
FGFR1 Others Human 人 FGFR1 / CD331 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 马血清25克
CM-H110人皮肤肥大细胞完全培养基100mLPEROXIDASE,HORSERADISH,RZ1.0辣根过氧化物酶试剂级红褐色至褐色粉末FROZENsigma
5-8F, 人高转移鼻咽癌细胞系 瘤,EL4IL-2细胞 PC-12(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤)144432-85-93-录-4-扶本硼酸3-Chloro-4-fluoropxenylboronic acid
植物源性成分荧光PCR检测试剂盒人脐带动脉内皮细胞 (HUAEC)( 5×105 )碳酸锰25克
CM-H088人腹膜内皮细胞完全培养基100mL-5-羟色胺肌酐 Serotonin creatinine sulfate salt mono... 61-47-2 100MG 通用试剂
BALB/C小鼠肝上皮细胞;BNL 1ME A.7R.1 小鼠小肠粘膜上皮细胞完全培养基 100mL三拂磺醋亚铁 IRON(II) TRIFLUOROMqTHcNqSULFONcTq 29163-91-6
RSC, 大鼠雪旺细胞 Rattus镉1克
EPHB4 Others Mouse 小鼠 EPHB4 / HTK 人细胞裂解液 (阳性对照) 测序分离胶NA