实时荧光定量PCR技术几个重要的名词概述
日期:2025-05-31 10:43
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摘要:
实时荧光定量PCR技术中有几个重要的概念,包括扩增曲线、基线、荧光阈值和域值循环数。
1、扩增曲线(amplification curve): 是在实时荧光定量PCR中监测到的荧光信号随着循环数变化而绘制的一条曲线。在进行PCR反应过程中,通过检测系统对PCR管内的样品进行实时检测,zui后将荧光信号值通过成像技术显现在计算机上。正常的扩增曲线包括四个阶段:基线期、指数增长期、线性增长期、平台期。
2、基线(baseline):是背景曲线的一段,在扩增反应的zui初数个循环里荧光信号变化不大,接近一条直线。
3、荧光阈值(threshold):是在...
实时荧光定量PCR技术中有几个重要的概念,包括扩增曲线、基线、荧光阈值和域值循环数。
1、扩增曲线(amplification curve): 是在实时荧光定量PCR中监测到的荧光信号随着循环数变化而绘制的一条曲线。在进行PCR反应过程中,通过检测系统对PCR管内的样品进行实时检测,zui后将荧光信号值通过成像技术显现在计算机上。正常的扩增曲线包括四个阶段:基线期、指数增长期、线性增长期、平台期。
2、基线(baseline):是背景曲线的一段,在扩增反应的zui初数个循环里荧光信号变化不大,接近一条直线。
3、荧光阈值(threshold):是在荧光扩增曲线指数增长期设定的一个荧光强度标准(即PCR扩增产物量的标准)。荧光阈值可以设定在PCR扩增的指数期。
4、阈值循环数:表示每个PCR反应管内荧光信号达到设定的荧光阈值所经历的循环数,研究表明,各模板的CT值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,即起始拷贝数越多,CT值越小;起始拷贝数越少,CT值越大。我们利用已知起始拷贝数的标准品可做出以起始拷贝数的对数为横坐标,CT值为纵坐标的一条标准曲线。只要获得未知模板的CT值,即从标准曲线上计算出该模板的起始拷贝数。