科研抗体两种标记法讲解
日期：2025-04-30 18:53
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摘要：
科研抗体标记法如下：
1、直接标记法：
抗体的准备：取提纯的Ig溶液测定蛋白质含量，置于三角烧瓶中加入生理盐水和0.5mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液，冰槽中搅拌5~10min；
荧光素的准备：按每毫克蛋白质加0.01~0.02mg的FITC计算，准确称取后加入抗体溶液中；
标记：边搅拌边加入荧光素，避免粉末黏附于壁上，置于4℃冰箱或冰库继续搅拌12~18h；
透析：结合完毕后，先将结合物以3000r/min离心20min，除去少量沉淀物后装入透析袋中再置于pH8.0缓...
科研抗体标记法如下：
1、直接标记法：
抗体的准备：取提纯的Ig溶液测定蛋白质含量，置于三角烧瓶中加入生理盐水和0.5mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液，冰槽中搅拌5~10min；
荧光素的准备：按每毫克蛋白质加0.01~0.02mg的FITC计算，准确称取后加入抗体溶液中；
标记：边搅拌边加入荧光素，避免粉末黏附于壁上，置于4℃冰箱或冰库继续搅拌12~18h；
透析：结合完毕后，先将结合物以3000r/min离心20min，除去少量沉淀物后装入透析袋中再置于pH8.0缓冲盐的烧杯中透析过夜；
过柱：取透析过夜的标记物，过葡聚糖凝胶G-25或G-50柱，分离游离的FITC，收集标记的荧光抗体进行鉴定。
2、间接标记法：
抗体的准备：0~4℃下，用0.01mol/L pH8.0 PBS将待标记的抗体蛋白溶液稀释到浓度为30~40mg/ml，置于三角烧瓶内放入冰槽中；
荧光素的准备：按每毫克蛋白质加入0.01mg的荧光素称取，溶解于等量的3%重碳酸钠水溶液中；将抗体蛋白溶液与FITC溶液等量混合，在0~4℃中搅拌18~24h，充分搅匀；透析或过柱层析。