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PCR扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散分析
日期：2025-04-30 20:06
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摘要：
PCR扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散分析：
1、酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。
2、dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。
3、MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。
4、模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。
5、引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应
6、循环次数过多；增加模板量减少循环次数至30，缩短退火时间及延伸时间，或改用二种温度的PCR循环。
7、退火温度过低。
8、电泳体系有问题：①凝胶中...
PCR扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散分析：
1、酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。
2、dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。
3、MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。
4、模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。
5、引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应
6、循环次数过多；增加模板量减少循环次数至30，缩短退火时间及延伸时间，或改用二种温度的PCR循环。
7、退火温度过低。
8、电泳体系有问题：①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大；②凝胶没有凝固好；③琼脂糖质量差。
9、若为PCR试剂盒则可能：①由于运输储存不当引起试剂盒失效；②试剂盒本身质量有问题，如引物选择、循环参数等选择不当。
10、降解的陈旧模板扩增也易产生涂布。