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RT-PCR技术检测步骤
日期：2025-06-15 12:42
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摘要：RT-PCR技术检测步骤
Real-time quantitative PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生，通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定的阈值的循环数（Ct值）与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小。
检测流程检测主要经过取样、留样、保存、核酸提取、上机检测等五个步骤：1、 取样：用咽拭子擦拭咽后壁及双侧咽扁桃体处各5~10次，且不断旋转拭子；
2、 留样：将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖子，进行留样；
3、 保存：将样品2~8℃保存，并及时送检；
4、 核酸提取：将灭活病毒后的样本进行核酸提取；用于后续检测；
5、RT-PCR核酸检测：将提取物进行RT-PCR扩增反应，反应时间约为70~80min。